硫乙醇酸盐流体对照培养基的应用！

                     硫乙醇酸盐流体对照培养基的应用！

一、背景

硫乙醇酸盐流体对照培养基主要用于培养需氧、厌氧和微需氧微生物，是培养厌氧菌的培养基。该培养基在药典中一直被用作无菌检查培养基，具有重要的作用。

原理：硫乙醇酸盐流体培养基的主要成分：胰酪蛋白胨、酵母浸出粉、葡萄糖、氯化钠、L-胱氨酸（半胱氨酸盐酸盐）、硫乙醇酸钠（硫乙醇酸0.6 mL）、琼脂、刃天青等。

其中胰酪蛋白胨、酵母浸出粉提供氮源以及供合成蛋白质必须的各种氨基酸和生长因子，葡萄糖提供碳源及能源；氯化钠维持均衡的渗透压；胱氨酸、硫乙醇酸盐、葡萄糖均可降低氧化还原电位的作用，防止过氧化物的积累对某些菌产生毒性，有利于厌氧菌的生长，另外，硫乙醇酸盐有钝化含砷和汞类药物及其他金属防腐剂的有害作用；刃天青作为氧化还原的指示剂，氧化时呈红色，以此指示培养基的氧化还原电位；琼脂可以防止液体对流，即防止二氧化碳、氧气和还原产物的扩散，有利于厌氧环境的形成。

硫乙醇酸盐流体培养基的特点：从硫乙醇酸盐流体培养基的成分分析可以总结出该培养基的特点主要有：含有较全面的营养，能满足绝大多数细菌的营养需求；培养基的不同深度上层、中层、下层部位可以分别模拟提供有氧、弱氧至无氧不同氧含量的梯度环境，使厌氧细菌、兼性厌氧细菌、好氧菌均可在此培养基中生长；成份相对简单，制作简便；含少量琼脂，流动性与普通液体培养基有区别。

二、应用

用于铜绿假单胞菌MLST分型及耐药机制研究：

用纸片扩散法对其进行常规的16种抗菌药物体外药敏试验。根据药敏结果选择碳青霉烯类或头孢他啶不敏感的896株铜绿假单胞菌进行多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing,MLST）分析,采用DNA拼接软件和网站鉴定等位基因型（Allele Type）和序列型（Sequence Type,ST）,借助BioNumerics软件对其进行遗传和多样性分析。体外药敏试验结果提示亚胺培南（Imipenem,IPM）、美罗培南（Meropenem,MEM）和头孢他啶（Ceftazidime,CAZ）的耐药率分别为23.1%、18.1%和15.3%,而其他主要β内酰胺类抗菌药物的耐药率在15-25%左右。MLST结果提示896株铜绿假单胞菌中,632株细菌属于116种ST型,201株属于104种新的已知基因组合,63株含某个或几个新管家基因型并组成了新的34种ST型。主要的ST型有ST244、ST277、ST235和ST274等。ST型种类与菌株数量间存在明显的线性相关,提示ST型种类较多且分散。

从BioNumerics软件生成的小生成树分析亦提示这些菌株的克隆型别较多,遗传背景多样。对627株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌进行碳青霉烯类耐药机制研究。对所有菌株进行PCR筛查常见β内酰胺酶基因,对筛查到的金属酶基因阳性的菌株进行脉冲场凝胶电泳（Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE）同源性分析,并利用S1核酸酶-PFGE和Southern blot杂交进行基因定位分析。选择四种不同表型的菌株,即137株IPM-R、MEM-I/S的,40株IPM-I/S、MEM-R的,118株IPM-R、MEM-R的,和75株IPM-S、MEM-S的菌株。